多肽抗原来利国际AG旗舰厅

多肽抗原方案设计

难于获得困难、分子量小、同源性较高不易与其他区分的抗原，我们可以考虑采用多肽合成方法制备抗原；多肽抗原为半抗原，必须与载体偶联形成*抗原才可以免疫动物。多肽抗原方案制备抗体核心是多肽选取与抗原表位的设计。多肽设计前首先对抗原蛋白进行系统分析，分析方法与原核重组表达蛋白相同，在此不做赘述。

1．多肽设计通用原则

u  外源性原则：

设计多肽序列与被免疫宿主蛋白序列不同源（Blast检索）。

u  特异性原则：

设计多肽序列与自身物种其他蛋白序列不同源（Blast检索）。

u  亲水性原则：

蛋白质都是将亲水部分暴露在外，只有抗原更好的溶于水相才能更好地激发免疫反应，因此设计的多肽一定要亲水性好（通过DNassist，GCG，ProtScale等软件预测亲水性）。

u  C末端性原则

末端肽段比内部肽段暴露性更好，更容易制备抗体，但膜蛋白C端疏水性比较强，一般选择N端多肽。

u  结构原则

序列不形成α-helix、内部重复或接近重复段的序列。

u  氨基酸原则

 序列内Pro(脯氨酸)一般不超过2个；同时尽量包括MHC类分子偏好的Asp，Tyr，Phe等氨基酸，避免容易发生糖基化的氨基酸（如Asn、 Ser 、Thr和Hyp）和磷酸化的氨基酸（Ser、Thr和Tyr）。

u  连接臂原则

一般在肽链上加一个联接臂便于多肽与载体偶联，常用的是加Cys的-SH，加在对抗体产生影响小的那一端：选择N末端多肽序列的加在多肽C端；选择C末端序列则-SH加在N端，选择中间肽段加在对抗体制备影响比较小的那一端。

u  长度原则

抗原表位一般是6～8个氨基酸组成，多肽做抗原的时候一般设计15～20个氨基酸，一方面为防止蛋白质水解，另一方面为了保证表位覆盖率。链太长则易造成链内二级结构，同时增加合成的成本。

u  纯度原则

用于制备抗体的多肽，85%以上的纯度就足够了，纯度越高合成的成本越高。

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